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- 分享！核酸凝膠染料的染色方案
- 點(diǎn)擊次數(shù)：1650 更新時(shí)間：2022-11-28
- 核酸凝膠染料是可用于檢測(cè)瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中雙鏈DNA（dsDNA）的靈敏的染料之一。由于核酸凝膠染料對(duì)dsDNA具有更高的靈敏度，因此其特別適合用于存在污染性RNA或ssDNA可能模糊測(cè)定結(jié)果的檢測(cè)。核酸凝膠染料具有極低的背景熒光，其光譜特性與現(xiàn)有儀器中的光源和濾光鏡套件非常匹配，這使其成為與激光掃描儀配合使用的理想選擇。核酸凝膠染料染色方案：我們發(fā)現(xiàn)通過后染色實(shí)現(xiàn)了最大的靈敏度，這也消除了核酸凝膠染料干擾DNA遷移的可能性。雖然預(yù)制方案更方便，但一些DNA樣本可能會(huì)出現(xiàn)遷移，強(qiáng)烈建議凝膠運(yùn)行時(shí)間不超過2小時(shí)。建議使用以下方案。可能需要進(jìn)行一些比較以確定哪一個(gè)更符合您的需求。1、后染色方案：①根據(jù)您的標(biāo)準(zhǔn)方案運(yùn)行凝膠；②通過將10000X儲(chǔ)備試劑稀釋到PH 7.5-8緩沖液中制備1X Cyber Green工作溶液；③將凝膠放入合適的聚丙烯容器中。輕輕加入足量的1X染色溶液浸沒凝膠；④在室溫下輕輕攪拌凝膠約30分鐘，避光；⑤使用254nm透射儀或使用長(zhǎng)路綠色濾光片（如SYBR濾光片或GelStar濾光片）的激光凝膠掃描儀對(duì)染色的凝膠成像。2、預(yù)染色方案：①使用標(biāo)準(zhǔn)方案制備瓊脂糖凝膠溶液；②在澆注凝膠前將10000X Cyber Green原液試劑以1：10000稀釋到凝膠溶液中并充分混合；③根據(jù)您的標(biāo)準(zhǔn)方案運(yùn)行凝膠；④使用254nm透射儀或使用長(zhǎng)路徑綠色濾光片的激光凝膠掃描儀對(duì)染色的凝膠成像。3、電泳前的DNA染色：①在電泳前，用1：10000稀釋的染料（TE，TBE或TAE）孵育DNA至少15分鐘。②根據(jù)您的標(biāo)準(zhǔn)方案運(yùn)行凝膠。③使用254nm透射儀或使用長(zhǎng)路綠色濾光片（如SYBR濾光片或GelStar濾光片）的激光凝膠掃描儀對(duì)染色的凝膠成像。
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