在基因治療、細胞轉染等眾多生物醫學研究中,PEI轉染試劑發揮著關鍵作用。以下是它的詳細配制步驟。
材料和試劑準備
在進行
PEI轉染試劑的配制前,需要準備好相關材料和試劑。包括高純度的線性PEI粉末、合適的緩沖液(如HEPES緩沖液)、核酸樣品(如質粒DNA)以及適量的水等。
第一步:配制PEI溶液
稱取適量的線性PEI粉末,通常根據所需濃度和轉染體系來確定具體用量。一般來說,可將0.5 - 1 g的PEI粉末溶解于適量的無水乙醇中(例如5 - 10 mL),攪拌至全部溶解,得到PEI乙醇溶液。注意要在通風良好的環境下操作,因為乙醇具有一定的揮發性。
第二步:脫醇處理
將PEI乙醇溶液緩慢加入到大量預冷的去離子水中(例如100 - 200 mL),邊加邊攪拌,使乙醇充分揮發,得到無醇的PEI溶液。這一步非常關鍵,因為乙醇可能會對后續的細胞產生毒害作用。
第三步:調節pH值
使用pH計測量PEI溶液的pH值,并將其調節至合適的范圍(通常在7.0 - 7.5之間)。可以使用1 M的NaOH或HCl溶液進行滴定調節,同時不斷攪拌溶液,使pH值穩定在目標范圍內。
第四步:確定轉染濃度
根據轉染實驗的具體需求,進一步稀釋PEI溶液至合適的濃度。一般來說,常用的轉染濃度范圍為1 - 5 μg/mL。
第五步:加入核酸樣品
在含有適量細胞培養液的細胞培養板中,加入準備好的核酸樣品(如質粒DNA),然后緩慢加入配制好的PEI溶液,使核酸與PEI按照適當的摩爾比(通常為1:3 - 1:5)混合,輕輕混勻。
第六步:靜置孵育
將轉染混合體系放置在37℃、5% CO?的培養箱中靜置孵育一段時間(一般為4 - 6小時),使PEI與核酸充分結合并進入細胞。
第七步:更換培養液
孵育結束后,小心地吸出舊的培養液,加入新鮮的全部培養液,繼續培養細胞。

通過嚴格按照上述步驟進行PEI轉染試劑的配制,可提高轉染效率,為后續的基因治療和細胞研究提供有力保障。