Calcein AM/PI Double Stain Kit 活細胞/死細胞雙染試劑盒
產品信息
產品貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格(元) |
FS1161-500T | Calcein AM/PI Double Stain Kit 活細胞/死細胞雙染試劑盒 | 500T | 1050.00 |
活/死細胞雙染試劑盒(熒光探針細胞染色)活/死細胞雙染試劑盒(熒光探針細胞染色)
試劑盒組分
編號 組分 保存方法 產品編號/規格
FS1161-500T FS1161-1000T
FS1161-A Calcein AM Solution (4mM) -20ºC避光 50μl 50μl×2
FS1161-B PI Solution(1.5 mM) -20ºC避光 200μl 200μl×2
FS1161-C 10×Assay Buffer -20ºC~4℃ 50ml 100ml
產品描述
本鈣黃綠素AM/碘化丙啶雙染試劑盒(Calcein AM/PI Double Stain Kit),包含鈣黃綠素AM和碘化丙啶兩種熒光染料,用于對活細胞和死細胞的同時染色,即是常稱的活細胞/死細胞雙染試劑盒(Live/Dead Cell Double Staining Kit)。
試劑盒工作原理在于:Calcein AM(鈣黃綠素乙酰甲酯),CAS 48504-34-1,一種具高度親脂性和細胞膜滲透性的活細胞熒光染料。本身不具熒光,一旦進入細胞后,被細胞內酯酶水解生成鈣黃綠素(calcein),產生亮綠色熒光(Ex/Em= 490nm/515nm)。因此,Calcein AM僅對活細胞進行染色。另一方面,碘化丙啶(PI),一種細胞核染料,不能穿透完整的活細胞膜。只能穿透死細胞的不規則區域進入細胞核,然后嵌入DNA雙螺旋區域,產生紅色熒光(Ex/Em= 535nm/617nm)。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發,因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞。而用545 nm激發,僅可觀察到死細胞。結合這些特點,Calcein, AM和PI經常被結合用作活細胞和死細胞的雙重染色。
注意事項
1)由于Calcein-AM對濕度非常敏感,若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后,必須緊緊密封蓋子。建議根據單次用量,分裝密封保存。Calcein-AM工作液必須現配現用。
2)碘化丙啶(PI)有一定的致癌性,操作時一定要注意防護。若接觸到皮膚,需要立即用自來水清洗。
3)為了您的an全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、試劑準備
1.1 1×反應緩沖液(Assay Buffer)的配制
從低溫冰箱內取出10×Assay Buffer,根據單次用量無菌條件取出適量,用去離子水(dH2O)做10倍稀釋以得到1×Assay Buffer。
1.2 1×染色工作液(Stain Buffer)的配制
1) 先將低溫保存的Calcein AM溶液 (4 mM)和PI溶液(1.5 mM)室溫回溫至少20min,使其充分融化。【注意:*次使用時建議對儲存液根據單次用量分裝,特別是Calcein AM,以減少反復凍融次數?!?br />二、染色步驟
常見問題
1、該試劑盒適用任何細胞類型?
基本上適用于任何含酯酶活性的動物細胞。植物和xi菌細胞因含有細胞壁,Calcein-AM不能進入因此無法染色。有可能對原生質體進行染色。
2、用相同濃度有可能對所有哺乳動物細胞進行染色?
對所有細胞都用相同的濃度是很不合理的。Calcein-AM和PI的zui加工作濃度根據細胞類型差異很大。有必要根據具體細胞來確定zui價染料濃度。參考說明書染料工作濃度優化方法。
3、Calcein-AM對細胞有毒?
與其他相似的活細胞染料比較,Calcein-AM基本無毒(毒性zui?。?。見文獻EL.S.D.Clerck,et.al., J.Immunol.Methods, 172,115-124(1994)
4、 試劑盒如何保存?
密封-20℃保存。Calcein-AM遇潮會水解,因此直至管子溫度達到室溫后才能開蓋。使用后擰緊蓋子。用緩沖液或者培養基稀釋后的染色工作液需即刻使用。不能保存后使用。